狂犬病毒(Ra) IgM 抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
使 用说 明(96T/48T)
作者: 江彬
Tel : 1991-4747-194
[原理]
本试剂盒采用亲和素-生物素化Ra纯化抗原预包被板ELISA 原理,检测人血清/血浆中存在的狂犬病毒 IgM 抗体,并配以酶标记抗人IgM单克隆抗体作为标记物。加入底物TMB显色后终止反应,在450nm波长测各孔O.D值,O.D值的大小与待检抗体含量成正比。生物素系统(biotin-avidinsystem)的稳固级联放大作用,使试剂的特异性、灵敏度、稳定性极大地提高是本试剂含有的独特优点。
[用途]
本试剂盒用于定性检测人血清/血浆中的狂犬病毒(RABIES VIRUS)IgM抗体,对因动物咬伤而致感染了狂犬病毒的诊断、流行病学调研和疫苗监测有重要意义。
适应范围:
动物咬伤致狂犬病毒感染的诊断和监测。
[试剂盒组成]
1、生物素化抗原预包被板 1块(8X12/4X12)
2、阴性对照1瓶(直接使用)
3、阳性对照1瓶(直接使用)
4、标本稀释液1瓶(20/10 ml,直接使用)
5、酶结合物1瓶(12/5ml,直接使用)
6、30X浓缩洗液
1瓶(20/10ml,加蒸馏水1:30稀释使用)
7、显示剂A、B液各1瓶(5/3ml)
8、终止液(2M H2SO4)1瓶(5/3ml)
9、说明书1份
[操作步骤]
1.将试剂盒平衡至室温后取出反应板拆封。
2.样本稀释:用标本稀释液以1∶101(5ul-500ul)稀释标本。吸取已稀释待检标本100ul于反应孔中,设阴、阳性对照(各100ul/孔),设空白对照(加100ul标本稀释液)一孔,轻拍混匀,37℃温育30分钟,用洗涤液洗板3次并在吸水纸上拍干。
3.加酶结合物:每孔2滴,混匀后置37℃温育30分钟。同上法洗涤3次并拍干。
4.显色:每孔加显色剂A、B各一滴,轻拍混匀(或震荡器混匀)后置37℃10分钟。
[结果判断]
1.目测:在白色背景下观察各孔显色情况,蓝色者为阳性,无色者为阴性。
2.酶标仪测定:每孔加终止液一滴,混匀后在450nm下测定各孔O.D值。
①P/N=标本O.D值/ 阴性对照O.D值。
②P/N≥2.1为阳性;
③1.5≤P/N<2.1为可疑标本;P/N<1.5为阴性。
④阴性对照(NC)小于0.10时以0.10计, 大于0.1小于0.21时以实际O.D值计算;若大于0.21时,实验可能出现了较大误差,需重复实验。
⑤阳性对照(PC)值通常≥0.4,实验成立,否则需重做。
[注意事项]
1.微孔板须密封防潮,从冷藏环境中取出时,应置室温平衡至潮气尽干后方可开启使用,余者封存置2-8℃。
2.滴加试剂前应将液体翻转数次混匀,滴加时保持瓶身垂直。
3.洗涤时每孔均须加满,防止孔内有游离酶不能洗净。
4.试剂置2-8℃存放,不能冻结,有效期10个月。
5.避免用溶血、混浊或脂血标本。
6.最好用新鲜标本,如需保存,可于2-8℃冷藏48小时或-20℃冻存4周(样本应避光)。